تاثير الاشعة فوق البنفسجية في نمو الفطرين Aspergillus flavus وAspergillus niger وانتاج الافلاتوكسينات
عذراء حرجان محسن
جامعة الكوفة \ كلية العلوم
قسم علوم الحياة
الخلاصة
اجريت هذه الدراسة لتقييم كفاءة الاشعة الفوق البنفسجية في نمو الفطرين Aspergillus flavus وAspergillus niger المعزولين من حبوب الحنطة وقدرتهما على انتاج الافلاتوكسينات و اظهرت النتائج تأثر النمو الشعاعي للفطرين عند المعاملة بالطول الموجي 800 و 860 nm, بينما اظهرت المعاملة بالطول الموجي 200 nm اقل تاثير تثبيطي اذ لم تتجاوز نسبة التثبيط 12.4 و14.5% للفطرين A.flavus وA.niger على التوالي . اضافة الى ذلك اثرت الاشعة وبجميع اطوالها الموجية المستعملة في الدراسة في معدلات تجرثم الفطرين A.flavus وA.niger .اذ كان اعلى معدل للتثبيط عند المعاملة بالطول الموجي 800 و 860 nmللفطرين A.flavus و A.niger على التوالي , اما عند المعاملة بالطول الموجي 200 nmسبب اقل تاثير تثبيطي اذ لم تتجاوز نسبة التثبيط للتجرثم للفطرين A.flavus وA.niger على التوالي . علاوة على ذلك اشارت نتائج التحليل الاحصائي ان الاطوال الموجية للاشعة لها دورا فعالا في خفض معدل الوزن الجاف لنمو الفطرين اذ كان الطول الموجي 800 و 860 nm الاكفأ في خفض معدلات الوزن الجاف لنمو الفطر للفطرين A.flavus وA.niger على التوالي. اما بقية المعاملات فلم تختلف بفروق معنوية في الفطريات المعاملة باطوال موجية مختلفة .
علاوة على ذلك اظهر الفطرين تباينا واضحا في فقدان قابليتهما على انتاج الافلاتوكسينات وحسب الاطوال الموجية . حيث فقد الفطر A .flavus قابليته على انتاج الافلاتوكسينات عند الطول الموجي 800 و 860 nm اما الفطر A.niger فقد قدرته على انتاج السم عند الطول الموجي 860 nm فقط مقارنة بمعاملة السيطرة التي كانت لها القدرة على انتاج السموم .
المقدمة
تنتج انواع من الفطر spp Aspergillus التي تنمو على الاغذية المختلفة العديد من السموم يطلق عليها الافلاتوكسينات Aflatoxins وهي مركبات سامة تؤثر في الفعاليات الحيوية لجسم الكائن الحي تؤدي بالنهاية الى هلاكه اذا ماتناولها بمستويات تفوق الحدود التي اتفق عليها دوليا على السماح بوجودها في المواد الاولية سواء المستعملة كمادة غذائية او تدخل في صناعة الاعلاف الحيوانية . ومن الحقائق الثابتة عبر السنوات القليلة الماضية انه كلما تم العثور على احدى سلالات الفطر Aspergillus المنتج للافلاتوكسينات في أي محصول زراعي فهذا يعني دون شك العثور على سموم هذه الفطريات ويمكن عندئذ اختبار طريقة ملائمة للتحري عن هذه السموم وتحديد كمياتها. ( 2003,Amit &Kumer).
تعد الاشعة فوق البنفسجية Ultra violate irrdation من انواع الاشعة غير المتأينة التي تستخدم في التطهير و القضاء على الاحياء المجهرية وتكون ذات اطوال موجية مختلفة تقع بين 210-3800 نانوميتر. وتستخدم في تعقيم المستشفيات و القضاء على انواع مختلفة من البكتريا و الفطريات المنتجة للسموم و خاصة الفطر Aspergillus spp وspp Fusarium وانواع من فطر Botrytis sp (Amit واخرون,. 2003) . وتكون هذه الاشعة ذات اطوال موجية قصيرة ونفاذية عالية داخل المادة الحية . الامر الذي يؤدي الى تجلط المادة البروتينية داخل جسم الكائن الممرض ممايؤدي الى القتل السريع لهذه الاحياء . وتوصلت الدراسات الحديثة الى ان نسبة المفقود من الاغذية بسبب الفطريات بلغ 25-30% او اكثر من الاغذية وهذا يمثل تهديدا حقيقيا للصحة العامة وعبئا على الاقتصاد القومي ولكن بعد استخدام تكنولجيا التشعيع ( استخدام الاشعة الفوق البنفسجية كانت ذات قدرة كبيرة على رفع مستوى الانتاج القومي من خلال القضاء على نسبة 95% من المسببات المايكروبية دون تاثيرها على البيئة وتلوثها ( Rassal, 2005) وقد نجحت بعض الدول في حفظ الاغذية باستخدام الاشعة وخاصة الحبوب اذ تم حفظ مايقارب مائتي الف طن من الرز والحنطة و الشعير كانت قد عرضت للاشعة ووضعت في مخازن ذات مواصفات عالية و استعمل في نفس الوقت للاستهلاك البشري دون أي اعراض تذكر (Ayala واخرون 2005) . ان عملية التشعيع عملية سريعة قليلة النفقات و لاتسبب اضرار للانسان و الحيوان دون رفع درجة الحرارة . وللتعرف على تاثيرات الاشعة الفوق البنفسجية على نمو الفطرين A.flavus وA.niger وانتاجها للافلاتوكسينات تم اجراء هذه الدراسة و التي تضمنت المحاور التالية :
1- عزل وتشخيص الفطرين A.flavus وA.niger
2- اختبار قدرة عزلتي الفطرين A.flavus وA.niger على انتاج الافلاتوكسينات
3 - تاثير الاشعة الفوق البنفسجية و بجرع مختلفة في نمو الفطرين A.flavus وA.niger وقدرتهما على انتاج الافلاتوكسينات
المواد وطرائق العمل
- 1الأوساط الزرعية Culture media:
A - وسط أكار مستخلص البطاطا و الدكستروز Potato dextrose agar:
حضر حسب طريقة Collee وآخرون (1996) وذلك بأخذ 200غم من مستخلص البطاطا بعد غسلها وتقطيعها إلى قطع صغيرة وضعت في أناء معدني ثم أضيف إليها لتر ماء مقطر ,وغليت لمدة 20دقيقة وبعدها رشحت بوساطة قطعة شاش نظيفة ثم أضيف إلى الراشح 20غم من سكر الدكستروز و15غم أكار وعقم بجهاز الموصدة لمدة 20دقيقة بحرارة 121مْ تحت ضغط 1جو, واستعمل الوسط في عزل وتشخيص الفطرين A.flavus وA.niger .
B - وسط مستخلص البطاطا والدكستروز Potato dextrose broth:
حضر بنفس الطريقة نفسها لكن بدون اضافة مادة الاكار إلى الراشح واستعمل هذا الوسط لغرض إكثار لقاح الفطرين A.flavus وA.niger . (Collee وآخرون ,1996).
C- وسط مستخلص جوز الهند لمعرفة قابلية عزلتي الفطر على انتاج السموم .
تم اخذ 300غم من مبروش جوز الهند أضيف إليها لتر ماء مقطر وبعدها رشحت بوساطة قطعة شاش نظيفة ثم أضيف إلى الراشح 20غم من سكر الدكستروز و 15غم أكار وعقم بجهاز الموصدة لمدة 20 دقيقة بحرارة 121مْ تحت ضغط 1جو Saito, & Machida). , 1999 ) .
-2 عزل وتشخيص الفطرين A.flavus وA.niger من حبوب الحنطة
جلبت حبوب الحنطة صنف المكسيباك ( 2008 ) من مناطق مختلفة من الاسواق المحلية لمحافظة النجف الاشرف وعقمت سطحيا بمحلول هايبوكلورات الصوديوم بتركيز 2% ولمدة 3 دقائق , غسلت بعدها بماء معقم , ثم جففت وزرعت في أطباق بتري حاوية على أكار مستخلص البطاطا والدكستروز (P.D.A) مع اضافة 40 ملغرام \لتر كلورامفينيكول لمنع نمو البكتريا ,وقد وضعنا خمس حبات في كل طبق أربع منها محيطية , والخامسة في منتصف الطبق ,حضنت الأطباق في درجة حرارة 25 مْ ± ولمدة 7 أيام (ميخائيل وبيدر,1982 والعنسي ,1999). بعد انتهاء مدة الحضن تم تنقية عزلتي الفطرين A.flavus وA.niger بنقل قرص من كل مستعمرة وزرعه في طبق حاوي على وسط P.D.A جديد , كررت العملية لعدة مرات,شخصت العزلتان اعتمادا على الصفات التصنيفية التي وضعها Rapper وFennal (1965).
3- اختبار قدرة عزلتي الفطرين A.flavus وA.niger على إنتاج الافلاتوكسين :
لغرض التعرف على قدرة عزلتي الفطرين على إنتاج سموم الافلاتوكسينات تم إتباع الخطوات الآتية :
1- زرعت عزلتي الفطرين على أطباق حاوية على وسط P.D.A وذلك بأخذ أقراص من مستعمرات كل من الفطرين بعمر أسبوع والتي سبق تعريضها لاطوال موجية مختلفة من الاشعة الفوق البنفسجية في اطباق حاوية على وسط مستخلص جوز الهند وبقطر 0.5سم لكل قرص وبمعدل قرص واحد لكل طبق وضع في مركز الطبق وحضنت الأطباق لمدة اسبوع .
2- بعد انتهاء مدة الحضن أخرجت الأطباق من الحاضنة وقلبت أطباق كل فطر بحيث أصبح غطاء الطبق للأسفل ثم وضع في غطاء كل طبق من الأطباق 0.2مل من محلول الأمونيا 20% ومن ثم أغلقت الأطباق وحضنت بدرجة حرارة 25 مْ ± لمدة 4 أيام , بعدها أخرجت الأطباق ولوحظت ألوان قواعد مستعمرات كل فطر حيث ان تحول قواعد المستعمرات الى اللون الوردي او البرتقالي يعني قدرة العزلة على إنتاج الافلاتوكسينات (Wyllie وMorehuse ,1977) .
4- تاثير الاشعة الفوق البنفسجية في بعض الصفات الفسلجية للفطرين A.flavus وA.niger
A – النمو الشعاعي للفطرين A.flavus وA.niger
إذ تم تعريض الفطرين الى اطوال موجية مختلفة ( 0, 200, 400, 600, 800, 860 ) nm لمدة 10 دقئق إذ وضع كل طبق حاوي على الفطر A.flavus وA.nigerعلى مسند مواجه لموضع او مصدر و بعد تعريض الفطرين الى الاشعة الفوق البنفسجية تم تحضير وسط مستخلص البطاطا والدكستروز (P.D.A) وبعد تصلب الوسط لقح مركز كل طبق بقرص 0.5 سم من الفطرين المعرضين للاشعة لمدة 10 دقائق بعمر سبعة ايام وحضنت الأطباق في درجة حرارة 25 مْ ± 1 و بمعدل اربع مكررات لكل جرعة و لكل فطر . سجل النمو الشعاعي لمستعمرات الفطر النامية كل 24 ساعة وذلك باخذ معدل قطرين متعامدين من ظهر كل مستعمرة يمران بمركز القرص ولمدة اربعة ايام , وتم حساب النسب المؤية لتثبيط النمو الشعاعي حسب المعادلة الواردة في شعبان و الملاح 1993 وهي كالأتي :
R1 –R2
Inhibition = ------------------------- Χ 100
R1
R1 أقصى نمو شعاعي لمستعمرة الفطر الممرض ( معاملة المقارنة ) .
R2 أقصى نمو شعاعي لمستعمرة الفطر الممرض في الأطباق المعاملة بالاشعة.
B- تجرثم الفطرين A.flavus وA.niger
اخذت اقراص بقطر 0.5 سم من وسط P.D.A النامي عليها الفطرين المدروسين بعد نهاية مدة التحضين في التجربة السابقة, وضع كل قرص في انبوبة تحوي 4.5 مل من محلول التثبيت F.A.A المكون من فورمالين : حامض الخليك : الكحول الاثيلي 18: رجت الانابيب جيدا وتم حساب اعداد الجراثيم باستخدام شريحة العد Hemacytometer كما تم حساب النسب المؤية لتثبيط تجرثم الفطرين حسب المعادلة التي ذكرها شعبان و الملاح ( 1993) :
معدل التجرثم في المقارنة - معدل التجرثم في المعاملة
النسبة المؤية لتثبيط التجرثم =------------------------------------------------------
معدل التجرثم في المقارنة
- C الوزن الجاف لنمو الفطرين A.flavus وA.niger
حضر الوسط الغذائي السائل( PDb) في دوارق سعة 250 مل وبمعدل 100 مل لكل دورق وعقمت الدوارق وتركت لتبرد بعدها بقرص 0.5سم من الفطرين المعرضين للاشعة بعمر سبعة ايام وحضنت الأطباق في درجة حرارة 25 مْ ± 1 ولمدة سبعة ايام و بمعدل اربع مكررات لكل جرعة و لكل فطر .بعد ذلك فصل الغزل الفطري عن الوسط الغذائي وذلك بغسله بالماء المقطر لعدة مرات لازالة اثار الوسط الغذائي ثم جفف الغزل الفطري بدرجة حرارة 85 مْ ولمدة ساعة , بعدها تم وزنه . ( Muhsin ; 1990).
5- التحليل الاحصائي :
حللت جميع النتائج المختبرية بحسب نموذج تصميم العشوائي الكامل التعشية Completely Randomized (C.R.D ) Desigen وتمت مقارنة المتوسطات حسب اختبار اقل فرق معنوي L.S.D وعلى مستوى احتمال 0.05, (الراوي وخلف الله , 1980 ).
النتائج و المناقشة
1- تاثير الاشعة الفوق البنفسجية في بعض الصفات الفسلجية للفطرين A.flavus وA.niger
A – النمو الشعاعي للفطرين
توضح النتائج المبينة في الشكل (1 ) التاثير التثبيطي للاشعة و الاطوال الموجية في النمو الشعاعي للفطرين A.flavus وA.niger اذ ثبط الفطر A.flavus عند المعاملة بالطول الموجي 800 و 860 nmبمعدل 39.9 و 38.9% على التوالي , اما الفطر A.nigerفقد ثبط نموه الشعاعي عند المعاملة بالطول الموجي اعلاه الى 39.2 و38.4% على التوالي .بينما اظهرت المعاملة بالطول الموجي 200 nm اقل تاثير تثبيطي اذ لم تتجاوز نسبة التثبيط 12.4 و14.5% للفطرين A.flavus وA.niger على التوالي .
وهذا يدعم ماتوصل اليه عدد من الباحثين اذ توصل soojin واخرون (2003 ) الى ان معاملة فطري A.niger و A. oryzae الناميين على حبوب الذرة الصفراء بالاشعة الفوق البنفسجية قد اثر على المستعمرات النامية إذ كانت 35.2 و39.8 % على التتالي قد انخفض نموها بعد التعريض للاشعة الى 22.6و30.6% على التتالي وهذا يعود الى موت السبورات النامية . واشار الصالحي (2002) الى ان أي عوامل فيزياوية كالاشعة و التيار الكهربائي تؤدي الى تكوين مركبات داخلية سامة للفطر تعرف Thiophosagen كما انه يمنع عملية التنفس عند كثير من الفطريات ممايؤدي الى تجمع الفسفور غير العضوي ويعرقل نمو الاحماض الامينية والنووية اضافة الى تاثيره في انتاج الطاقة .
10.6 L.S.D
[IMG]file:///C:/Users/X6A12F~1/AppData/Local/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image002.gif[/IMG]
شكل (1 ) التاثير التثبيطي للاشعة و الاطوال الموجية في النمو الشعاعي للفطرين A.flavus وA.niger
2- تجرثم الفطرين A.flavus وA.niger
تبين النتائج المشار اليها بالشكل ( 2) ان الاشعة وبجميع اطوالها الموجية المستعملة في الدراسة اثرت في معدلات تجرثم الفطرين A.flavus وA.niger اذ وصل اعلى معدل للتثبيط عند المعاملة بالطول الموجي 800 و 860 nmالى 89 و92% على التوالي للفطر A.flavus , اما الفطر A.nigerفقد وصل اعلى معدل للتثبيط عند المعاملة بالطول الموجي اعلاه الى 87 و89% على التوالي اما عند المعاملة بالطول الموجي 200 nmسبب اقل تاثير تثبيطي اذ لم تتجاوز نسبة التثبيط للتجرثم 25 و27% للفطرين A.flavus وA.niger على التوالي .. وهذا يدعم ماتوصل اليه Frazier واخرون (2004)) ان الاشعة الفوق البنفسجية تؤثر على عدد السبورات المنتجة من قبل عدد من الفطريات ,Penicillum Alternaria, Aspergillus , Carvularia عند استخدام الاشعة و بجرعة قدرها 400-890 nm اثرت وبشكل ملحوظ على حيوية السبورات وعدد المستعمرات النامية الامر الذي يؤثر على قابلية الفطر على النمو وقابليته على انتاج السموم اضافة الى تاثير الاشعة على بعض الانزيمات التي تشترك في عملية التجرثم .
30.5 L.S.D
[IMG]file:///C:/Users/X6A12F~1/AppData/Local/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image004.gif[/IMG]
شكل ( 2) تاثير الاطوال الموجية في معدلات تجرثم الفطرين A.flavus وA.niger
3- الوزن الجاف لنمو الفطرين A.flavus وA.niger
اشارت نتائج التحليل الاحصائي المبينة في الشكل ( 3)ان الاطوال الموجية للاشعة لها دورا فعالا في خفض معدل الوزن الجاف لنمو الفطرين اذ كان الطول الموجي 800 و 860 nm الاكفأ في خفض معدلتا الوزن الجاف لنمو الفطر A.flavusالى 0.402 و0.309 غم على التوالي, اما الفطر A.niger فقد انخفض معدل الوزن الجاف الى 0.404 و0.302 غم على التوالي. اما بقية المعاملات فلم تختلف بفروق معنوية في الفطريات المعاملة باطوال موجية مختلفة . وتوصل Henk, Sanna 2000)) الى انه كلما زاد معدل التشعيع او التعرض للتيار الكهربائي زاد معدل التسمم او التثبيط وهذه النتيجة طبيعية اذ ان بزيادة أي مادة مؤثرة سواء كانت فيزياوية ( التشعيع ) او كيميائية ولو بكميات قليلة تزيد من احتمالية وصولها الى المواقع الحساسة في الكائن الحي اضافة الى صعوبة التخلص منها بعمليات الايض المختلفة ممايؤدي الى موت الكائن الحي او تقليل نشاطه وتقليل معدل الاوزان لتلك الفطريات . Annie) واخرون2002).
0.202 L.S.D
[IMG]file:///C:/Users/X6A12F~1/AppData/Local/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image006.gif[/IMG]
شكل ( 3) تاثير الاطوال الموجية في معدل الوزن الجاف لنمو الفطرين A.flavus وA.niger
3- تاثير الاشعة الفوق البنفسجية في قدرة عزلتي الفطر A.flavus وA.niger على انتاج الافلاتوكسينات.
بينت نتائج اختبار قدرة عزلتي الفطر A.flavus وA.niger على إنتاج الافلاتوكسينات بعد تعريضها للااشعة ان العزلتين اختلفت قدرتهما على إنتاج الافلاتوكسينات اذ وجد ان الطول الموجي 800 و 860 nm قد اثرت على الفطر A.flavus من ناحية عدم قدرته على انتاج الافلاتوكسين مقارنة بمعاملة السيطرة , من ناحية اخرى اثر الطول الموجي 860 nm على الفطر A.niger اذ فقد قدرته على انتاج الافلاتوكسين جدول (1 ) وهناك احتمال حدوث تغيرات اوتلف في اجزاء من DNA الخلايا الفطرية وخاصة تلك التي تمتلك اليات ضعيفة لاصلاح نفسها ( Sumitra & (1999 ,Nayna , او حدوث تغيرات في استنساخ DNA الخلايا عند التعرض لهذه الاشعة, وان بعض مستويات هذا التغير يحدث خلال تعرض الفطر للاشعة الفوق البنفسجية لمدة ساعة (2005, Mateja) وتعتبر DNA من اكثر اجزاء الخلية تضررا بسبب وقوع طيف امتصاصها في منطقة الاشعة الفوق البنفسجية وان جرع قليلة كفيلة بقتل بعض الطفرات Mutant التي لها الية ضعيفة لاصلاح ال DNAالمتضرر .( 2004 ,Suttle.) . كما وتسبب في تلف الاحماض النووية و البروتين ) Caasi-Lit واخرون , 1997) . اوقد يعود هذا الى حدوث طفرة نتيجة للتعرض للاشعة و تعتبر الاشعة الفوق البنفسجية من المطفرات الفيزيائية بسبب الامتصاص القوي عند الاطوال الموجية المختلفة وخاصة عند الطول الموجي 600-890 nm وتسبب ما يسمى photo chemical dimerizaition للاحماض الامينية المتجاورة و هذا بدوره يؤدي الى الاضرار بسلسلة الحامض النووي DNA وهذا النوع من الطفرات يسمى طفرات مستحثة (Vreugdenhil, 2004 ) .
جدول (1 ) تاثير نوع الفطر و الاطوال الموجيه للاشعة الفوق البنفسجية في قدرة عزلتي الفطر A.flavus وA.niger على انتاج الافلاتوكسينات
نوع الفطر الطول الموجي/ nm انتاج الافلاتوكسينات A.flavus 0
200
400
600
800
860+
+
+
+
-
-A.niger 0
200
400
600
800
860+
+
+
+
+
-
(+) قدرة عزلة الفطر على انتاج الافلاتوكسينات
(-)عدم قدرة عزلة الفطر على انتاج الافلاتوكسينات
المصادر العربية
- الراوي ، خاشع محمود وعبد العزيز خلف الله (1980) تصميم وتحليل التجارب الزراعية . دار الكتب للطباعة والنشر – جامعة الموصل . 488 صفحة .
- - الصالحي،علي عبدالأمير مهدي. (2002). حساسية البطاطا (Solanum tuberosum L.) المكثرة خارج الجسم الحي لأشعة گاما. أطروحة دكتوراه- كلية الزراعة-جامعة بغداد.
- العنسي ، عادل عبد الغني لطف (1999) . المقاومة المتكاملة لمرض الذبول الفيوزرامي في الطماطة المتسبب عن الفطر Fusarium oxysporum Fosp. Lycopersici . رسالة ماجستير – كلية الزراعة -جامعة البصرة.
- شعبان , عواد ونزار مصطفى الملاح .( 1993) . المبيدات . , دار الكتب للطباعة والنشر – جامعة الموصل.520 صفحة .
- ميخائيل , سمير وتركي بيدر (1982) . أمراض البذور . دار الكتب للطباعة والنشر – جامعة الموصل.
References
- Amit, K.P. ; T.S. Rawat and A. Kumer. (2003). Shelf life quality of ber (Zizyphus mauritiana Lamk.) fruit cv. Umran in response to post harvest application of ultra violet radiation and pacloputrazol. Plant Foods for Human Nutrition. 58(3):1-7.
- Annie, L. ; C. Goyer; L. Ruest; R. Brezinski; D. L. Crawford and C. Beaulieu. (2002). Effect of amino acids on thaxtomin A biosynthesis by Streptomyces scabies. Can. J. Microbiol. 48 :359-364.
- Ayala, T., D.E. Akin; J.A. Foulk and R.B. Dodd. (2005). Effect of two growth regulators on yield and fiber quality and quantity in flax (Linum usitatissimum L.). Plant Growth Regulation Society of America Quarterly. November, 30.
- Caasi-Lit, M. ; Whitecross, M.I. ; Nayudu, M and Tanner, G.J. (1997). UV-B irradiation induced differential leaf damage, ultrastructural changes and accumulation of specific phenolic compounds in rice cultivars. Aust. J. Physiol. 24: 261-274.
- Collee ,J.G. ;Fraser, A.G. ; Marmion ,B.P. and Simmons ,A.(1996). Practical Medical Microbiology . Mackie and Macarthey pearson professional limited .14th ed .
- Frazier, M.J. ; G.E. Kleinkopf and R. Brey.( 2004). High-energy ionizing radiation for potato sprout control. The Potato Association of America. 81(1):59-60.
- Henk, R.B. and R.L. Sanna. (2000). Netherlands Catalogue of Potato Varieties. NIVAA. Netherlands pp. 255.
- Mateja, G.( 2005). Combined impact of solar UV-B radiation and selenium treatment on respiratory potential of pumpkins (Cucurbita pepo. L.) Acta Agriculturae Slovenica. 85 (2) : 337-342.
- Muhsin, T.M.(1990). effect of salts on the growth of fungi associated with halophyts in viro Basrah J.ofAgric. 3(1-2): 151-159.
- Nayna, G. and V. Sumitra. 1999. Effects of mercury and chromium on peroxidase and IAA oxidase enzymes in the seedlings of Phaseolus vulgaris . Turk. J. Biol. 29:15-21.
- Raper , K.B. and Fennel ,D.I.(1965). The genus Aspergillus Williams andWilkins company . Baltimore ., pp :686.
- Rassal , Bull , inst . chem. ( 2005 ). Effect of U.V. Rays on the Accumulation of catalase in condia of Aspergillus spp . Mol. Gen. Genet. 264: 521-530.
- Satio, M& Machida,S. (1999) . Arapid identification Methods for Aflatoxin- producing strains of Aspergillus flavus & Aspergillus parasiticus by ammonia
vaper. Mycoscience 40; 205- 208.
- Soojin , L.B., stool & Germones & T.D.Zucchi, ( 2003 ) . Induction of Miotic crossing – over in diploid strains of Aspergillus nidulans using low dose U.V. Rays . Soc . 98 : 36.
- Suttle, J.C.( 2004). Regulation of tuber dormancy. The Potato Association of America. 81(1):90.
- Vreugdenhil, D.(2004) a. Is tuber sprouting the reverse of tuber initiation. The Potato Association of America. 81(1)93-94.
-Wyllie, T.D. and Morehouse, L.S.(1977). Mycotoxic fungi , Mycotoxins , Mycotoxicosis. An encyclopedic hand book. Vol 1. Mycotoxic fungi chemistry of Mycotoxins .Dekker., pp. pp.538.
رد مع اقتباس